20世纪90年代以来，国内外学者通过检测NLF中的成分，研究呼吸道过敏性疾患及有毒有害刺激性气体对呼吸系统的危害。NLF的检测可间接或直接反映呼吸道的病理变化，可广泛应用于大气污染、有害气体及环境变应原等相关的呼吸系统疾病中。NLF具有无创伤性和易于操作的优点，在大规模人群流行病学调查中或健康筛查中具有明显的优势。近年来蛋白质组学的发展，作为体液的NLF的研究也越来越得到人们的关注。
1 NLF中的组分及其采集方法
NLF中含有丰富的细胞或可溶性成分，由于呼吸道症状的出现与一些可测到的炎性介质及细胞成分有关，接触不同种类的有害因素后，比较NLF中各种生物标志物的变化模式有助于阐明致病机理。
NLF中含有许多炎性或过敏性生物标记物，通过离心可以将细胞成分和可溶性成分进行分离。正常人群NLF中的细胞主要为中性粒细胞，嗜酸性粒细胞和淋巴细胞，一些主要蛋白质为嗜酸性阳离子蛋白（ECP），白细胞趋化因子－8（IL-8），克拉拉细胞蛋白－16 （Clara cell protein 16,CC-16），脂皮质素－1（lipcortin-1）等。在病理和刺激因素作用条件下，正常人群的NLF还可产生一些代谢物和渗出物，如尿酸、尿素等。
翟日洪［2］和Graham［1］所提出的NLF采集方法为：受检者取坐位，头颈后仰45°，抬高腭部并关闭鼻咽部，检查人员用一次性注射器将定量的37℃生理盐水滴入受检者两侧鼻腔，嘱受检者保持颈后仰10 s，然后让其低头使灌洗液流入一消毒过的漏斗，漏斗插入一干净的试管以收集灌洗液，漏斗内壁衬有两层消毒纱布以滤去可能存在的鼻内黏液，将收集有灌洗液的试管迅速置于-20℃保存，24 h内测定灌洗液中各项指标的含量及其活性。
2 NLF的组分检测及其应用研究
鼻灌洗法操作简便、安全，是研究呼吸道病理生理变化的一种有效方法。为探讨氯气损害呼吸道的作用机制，翟日洪等［3］研究了17名造纸工人接触氯气前后鼻灌洗液中尿素、尿酸、白细胞介素-8等炎症标志物的浓度变化，结果表明，吸入氯气后，它们的浓度明显升高。接触氯气4周后，NLF中一氧化氮，丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、维生素C的含量及活性监测结果显示，NLF中一氧化氮、谷胱甘肽含量显著升高［2］。刘宏亮等［4］分别用0、1、2、3 mg/m3的甲醛对10名受试者进行眼部控制暴露，结果表明甲醛暴露后NLF中的P物质含量增加，NLF中的P物质可作为评价甲醛急性刺激效应的生物标志物。Pazdrak等［5］在研究甲醛的过敏效应时发现，运用甲醛进行激发试验，在激发前、后不同时相检测NLF中的白蛋白和总蛋白水平，过敏患者NLF中的白蛋白和总蛋白浓度均有增加。Palczynski等［6］对戊二醛的过敏效应研究中也得出相同的结论。为研究挥发性有机物的吸入对NLF中生物标志物的影响并评价鼻灌洗法的可行性，王春等［7］对室内装修油漆工的鼻灌洗液中白细胞介素、ECP等含量进行了检测，结果发现所测的白细胞介素、ECP等炎症性生物标志物含量均高于对照组，吸入挥发性有机物可对呼吸道产生一定的炎症效应，增加鼻炎、哮喘等过敏反应的可能性。
Palczynski等［8］运用鼻激发试验检测患者对氯胺T（Chloramine T）的呼吸道过敏性，结果发现过敏者的NLF中嗜酸性粒细胞数、嗜碱性粒细胞数和白蛋白、类胰蛋白酶、ECP的浓度均显著升高，提示NLF的组分分析能为氯胺T的过敏者提供诊断依据。Krakowiak等［9］对职业性过敏患者的研究中和Bernardini［10］，Jacobi等［11］在哮喘的研究中也有类似的发现。在变应性鼻炎的发病研究中，洪苏玲等［12］采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定了30例变应性鼻炎患者及20例健康对照者血清、NLF中ECP和可溶性E2选择素的浓度，结果发现变应性鼻炎组NLF中的ECP含量明显高于对照组。Rami等［13］研究了29例季节性过敏性鼻炎患者、21例长期性过敏性鼻炎患者及20例健康志愿者NLF中嗜酸细胞活化趋化因子和α2巨球蛋白的表达情况，结果发现，与健康志愿者相比，季节性过敏性鼻炎患者和长期性过敏性鼻炎患者NLF中嗜酸细胞活化趋化因子的水平显著增高，发作期季节性过敏性鼻炎患者和长期性过敏性鼻炎患者嗜酸细胞活化趋化因子的水平显著高于非发作期季节性过敏性鼻炎患者；发作期季节性过敏性鼻炎患者NLF中α2巨球蛋白的表达水平显著地高于健康志愿者以及非发作期季节性过敏性鼻炎患者；发作期季节性过敏性鼻炎患者和长期性过敏性鼻炎患者NLF中嗜酸粒细胞的数量与健康志愿者相比显著地增多，发作期季节性过敏性鼻炎患者NLF中嗜酸粒细胞的数量显著高于非发作期季节性过敏性鼻炎患者；嗜酸细胞活化趋化因子、α2巨球蛋白和嗜酸粒细胞的数量，三者紧密相关。Sugimoto等［14］运用高效液相色谱技术检测了47名过敏性鼻炎和12名健康志愿者NLF中4种前列腺素（PGs）（PGD2，PGE2，PGF2α和 6－酮－PGF1α）的含量，结果显示两组间PGD2，PGE2的含量差异有显著性，过敏性鼻炎组组胺的含量显著增高；经过抗组胺药物治疗后，过敏性鼻炎组NLF中的组胺含量有一定程度的下降，但PG含量没有显著下降。
在灌洗液中加入激发物、药物进行刺激试验或疗效鉴定，张宗芬等［15］在鼻部变应原激发试验（NAC）前、后24 h，取9个时相NLF中的ECP、IL25浓度为指标，观察并比较ECP、IL25在过敏性鼻炎（AR）发病的病理、生理过程中的作用。在探讨NLF中细胞间黏附分子－1（ICAM-1）和白细胞介素－6（IL-6）水平及其与气道反应性的关系时，张秋贵等［16］采用ELISA法检测了54例变应性鼻炎患者及20例健康对照者，结果显示在特异性变应原鼻激发试验后1 h NLF中ICAM-1和IL-6的浓度可以反映AR的严重程度而且NLF较传统的鼻黏膜活检更加安全、简便、实用，病人易于接受，不受病情变化影响，适于临床动态观察患者病情的变化。
3 蛋白质组学在NLF中的运用
“蛋白质组”（proteome）最早由澳大利亚学者Wilkins和Willianms于1994 年提出，并由Wasinger等于1995年首次公开发表［17］，是指基因组表达的全部蛋白质及其存在形式。蛋白质组学是基于蛋白质分离技术同时对大量蛋白质表达水平及蛋白质翻译后修饰、蛋白质的结构功能及相互作用等进行研究的学科［18］。在众多的NLF蛋白质中，仅仅通过研究某一种或某几种蛋白质的含量变化来揭示疾病的发生发展显然是不够的，若希望对某种疾病有一个明确而较全面的认识，就需要对NLF的所有蛋白质进行综合评价。
蛋白质组的研究流程大体可分为分离、鉴定、分析三步，首先提取蛋白质，进行双向电泳以分离蛋白质，然后进行蛋白质样品显色，切下待分析的蛋白质斑点，用胰蛋白酶胶内消化，接着对消化后的多肽片段进行生物质谱分析，得到肽质量指纹图谱，最后通过数据库检索对蛋白质进行鉴定及功能分析。
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D-PAGE）的发展使得对蛋白质混合物的分离达到可重复性和高分辨率，使得定性和定量分析细胞或组织标本中的蛋白质成为可能。20世纪70年代随着软电离技术ESI（电喷雾电离）和基质辅助的激光解析电离化飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrum，MALDI-TOF-MS）技术的出现，质谱成为现代蛋白质科学中最重要和不可缺少的部分［19］。
Lindahl等［20］就曾对过敏性鼻炎及哮喘患者NLF中的蛋白质进行分离，结果发现，与正常人相比，患者NLF中的CC-16蛋白减少而lipcortin-1升高，并且这两种蛋白质可能对过敏性鼻炎及哮喘的发病发挥一定的作用。Ghafouri等［21］对吸烟者和非吸烟者NLF的蛋白质进行了研究。结果发现，与非吸烟者相比，吸烟者的NLF中克拉拉细胞分泌蛋白减少，脂皮质素-1变异修饰体、3种酸性形式的α1抗胰蛋白酶和1种磷酸化半胱氨酸蛋白酶增多。而且吸烟者的NLF富含较多的腭肺鼻上皮克隆（palate, lung and nasal epithelial clone，PLUNC），一种近来被识别的气道刺激标志物 ［22］。这些结果显示，NLF的双向电泳结果可用于吸烟者NLF中表达蛋白变化的评估。克拉拉细胞分泌蛋白CC16，CC10和脂皮质素-1是两种抗炎及磷脂酶A2抑制蛋白，这些蛋白表达水平的改变对由吸烟引起的气道炎症而言非常重要。
4 展望
鼻灌洗方法易操作、无侵害性，指标客观可靠，具有广阔的应用前景。在NLF的蛋白组学研究中样品前处理过程主要包括三方面内容：① 去除高丰度蛋白质，提高对低丰度蛋白质的检测；② 降低体液样品中的盐浓度，提高等电聚焦效果；③ 尽可能分成多个组分，富集低丰度蛋白质，提高分辨率。在不久的将来, 有望建立一个包括人各种肺病的NLF和BALF的完整二维电泳图谱。而基于上述有效蛋白质组的研究，对于明确各种肺病的发病机制、疾病的诊断及判断疾病的预后等将产生广泛而深远的影响。
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狗鼻子VS人鼻子
功能差不多
在主要功能上，狗鼻子和人鼻子相差不多。喘气儿、闻味儿。我们都知道，狗狗的爪子远远没有人类的手那样灵巧，鼻子有时也会起到一些类似人手的作用，因此，我们也能看到狗狗用鼻子拱土。除了狗狗之外，鼻子灵活到可以当“人手”用的动物还有很多，大象就是其中的佼佼者。
构造差不多
哺乳动物的鼻子大多数都很类似，基本结构都是由外鼻、鼻腔和鼻窦构成。即使像大象这样鼻子特别长的动物，其基本结构也大体相同，只是象鼻上的肌肉比其他动物复杂得多。不过，狗狗和大象的鼻子和上唇都已经结合在了一起，没有显著的分界，这一点和人类的情况有所不同。
灵敏度差很多
和人相比，狗狗的鼻子相当灵敏。它的嗅觉能力是人类的40倍。然而，如果在整个哺乳动物中进行排位，它们就无法称雄了。哺乳动物中，以腐肉和蚂蚁为食的动物的嗅觉最灵敏，大象的嗅觉也比狗狗灵敏很多。人类利用狗狗的嗅觉训练缉毒犬、搜爆犬，更多是因为狗是最善于和人交流的动物。
千差万别的鼻子
都说狗狗是从狼进化而来的。各种各样的狼的鼻子都相差不多，但是在经过人类对犬种的定向培育后，鼻子却成了区别犬种外形的最重要特征之一。人类按照自己的喜好改变了物种的基因，这种培育经历了漫长繁复的过程。
被过分炒作的鼻子
有些犬种的鼻子形状被过分炒作，成为人们以讹传讹的牺牲品。其实，对于纯种犬来说，所有的标准和要求，都应有它的初衷，如果你懒得研究，最简单的方式还是通过正规犬舍购买，以免被骗。
松狮犬：狗贩子会强调追求面包形的口吻部，也就是肉多的鼻子。但实际上，在松狮犬的标准中，只是要求鼻子的形状宽大，同时还要求口鼻的衬托作用不能过于夸张，不能影响其方形头的外观形状。
苏格兰牧羊犬：有些人认为苏格兰牧羊犬的长鼻子是最大特点，因此会认为鼻子应该又长又细，实际上，苏格兰牧羊犬吻部的要求并不是这样。在犬种标准中，它的吻部长度应该和颅骨长度大致相等，且不能突然变窄。
在鼻子上
和大象一样，狗狗的鼻子和上唇也连接在了一起（在这一点上人类的鼻子显得比它们独立得多），这个部分被称为狗狗的口吻部。但主人大多将这里全都俗称为“鼻子”。
在口吻部，长有胡须和很多细微的绒毛，这可不仅仅是装饰。在胡须和绒毛的根部布满了神经，狗狗依靠这些神经来对外界的环境进行辅助判断。
对于视力变差的老年犬，胡须的辅助感觉尤为重要，甚至可以帮助狗狗判断方位。虽然参赛犬和许多需要美容的狗狗会被拔除胡须，但这样的情况越少越好。
禾仕嘉温馨提醒
在呼吸的过程中，空气通过鼻腔时，变得更加温暖、湿润，以便更适应肺部的环境。扁脸的狗狗鼻腔很小，呼吸道非常短，在秋冬很容易患上呼吸系统的疾病，而在夏天，则更容易中暑。如果你喂养这样的狗狗，必须更加注意这些方面的问题。
鼻镜——鼻头的特殊称呼
狗狗的鼻头，有个称呼的术语——鼻镜。这里集中着多种皮肤腺体，可以分泌液体，保持鼻头湿润。很多狗狗的鼻镜都是黑色的，但是也有些狗狗的鼻镜本身就应该为其他颜色，比如粉色、肝色、棕色或者和被毛同色等。
大爱黑鼻头
有些主人认为，鼻镜的颜色深代表着健康，尤其是原本是黑色鼻镜的狗狗的主人。而事实上，鼻镜的颜色变浅并不一定就是狗狗生病了，最初人们喜欢黑鼻头更多是因为这样黑得发亮的鼻镜更漂亮。
有些狗狗在幼犬时期，鼻镜是黑色的，之后会慢慢变成棕色，颜色越来越浅，最后甚至成为粉色。有些狗狗的鼻镜上会渐渐长出浅色的斑，变成花鼻头。出现这种情况是最让主人抓狂的，要先知道原因再想对策。
神奇的“酶”
这样的黑鼻头变浅，是黑色素沉着出现了问题。很多时候色素沉着是由基因决定的，但年龄、温度、身体状况等，均对此有影响。
负责色素沉着的物质，被称为酪氨酸酶。近些年来，对这种酶的研究逐渐增多，在女性的美白、祛斑产品中，往往会使用可以抑制酪氨酸酶活性的成分。当酪氨酸酶不再活跃时，色素沉着就会变得缓慢。
“酶”的活性
酶的活性受到多种因素共同作用的影响，其中，以下2项已被广泛认定。狗狗的鼻镜是因此而褪色，应属正常现象。
年龄——酪氨酸酶活性下降的原因之一，这导致黑色素沉着效果变差。人老了以后头发会变白，也有类似的原因。
温度——酪氨酸酶对温度也很敏感，在温暖的环境下，其作用更强。因此，很多主人会发现，在夏天时，狗狗鼻镜的颜色变浅了，等到了冬天就会恢复成黑色（这就是俗称“雪鼻”的来历），有些狗狗的被毛颜色甚至也会出现相同的变化趋势。
传闻中鼻镜变黑的窍门验证
晒太阳
当狗狗的鼻头变成粉红色，想依靠晒太阳把鼻头晒黑，这种想法恐怕是来源于暴晒会使人的皮肤变黑。
虽然说在阳光暴晒下，温度的提升可能会使酪氨酸酶的活性增加，但这种说法已经被无数生活在阳台上的狗狗证实无效。同时必须要提醒主人，在夏天，粉色鼻镜格外需要保护，尤其是柯利犬，鼻镜很容易被晒伤，出现红肿、溃疡甚至癌变。在国外，有些主人会将狗狗的鼻镜部分文成黑色以加强保护，或者在此处涂抹宠物防晒霜。
验证失败！
海藻粉
关键词：犬；嗅觉系统；解剖结构；传导通路；受体；基因
中图分类号：S829、2 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2016）12-0005-04
嗅觉是犬赖以生存的特殊感觉，嗅觉系统的研究已成为当今动物学研究的热点之一。经过长期的自然进化，犬嗅觉系统为性能最为卓越的化学传感系统，能够从复杂的环境中分辨和识别成百上千种只有痕量水平的各种气体分子。近年来，前人对犬嗅觉系统及其受体等进行了一系列研究，并取得了很大进展，对于犬嗅觉系统受体、基因及功能基因组学等相关领域仍需要深入研究，进一步揭示犬的嗅觉机制，为加快培育高嗅觉灵敏性犬育种工作提供理论指导，同时，也可为以嗅觉研究为基础的其他交叉学科带来新的发展契机。
1 犬嗅觉系统形态学特征
1、1 犬嗅觉系统解剖结构及特征
犬嗅觉器官的解剖结构主要包括鼻腔、犁鼻器、鼻甲骨、鼻窦、筛骨、嗅黏膜和嗅球。犬鼻较长，鼻腔较宽大，每次吸入空气的量很大，鼻道内没有鼻毛，衬有黏膜，犬鼻的长度暗示着敏感性的成倍增强，进化上犬鼻呈加长趋势。梨鼻器是位于鼻底和梨骨两侧组织中的特殊嗅觉器官，是一种感觉外激素的化学感受器，呈成对的小盲管状，常为小泡状器官。犁鼻器的外侧部覆有柱状纤毛上皮，上皮下含有较大的腺体和一膨胀体，内侧为较厚的嗅上皮，其中有双极嗅细胞及支持细胞。犁鼻器在位置、神经分布、传入途径和功能方面，与鼻腔嗅区是不相同的。犬有3个鼻甲骨复杂卷曲，包括上鼻甲、中鼻甲和下鼻甲，起着调节吸入空气温度和湿度的作用。脑部横断面的研究表明，后半个鼻腔几乎充满了筛鼻甲骨，在筛鼻甲骨的黏膜层中拥有大量的嗅觉受体，筛鼻甲能够使犬吸入更大体积的气体，并控制着此处鼻窦的开合，并且由此进入鼻窦。鼻窦位于头骨中，与鼻腔相通，其中内衬着可能具有嗅觉功能的黏液样细胞，使吸入的空气有足够回旋的空间进行加温和湿润。犬的筛骨与颅骨结合，因结构极为复杂又被称为筛骨迷路，其上皮是嗅黏膜的密集地，也是嗅觉功能的发生地，犬的筛骨有筛板和筛孔，嗅神经纤维经筛孔从颅骨穿出。鼻黏膜也被称作嗅黏膜，被覆于整个鼻腔的内部，由嗅上皮和固有层组成，嗅黏膜含有嗅细胞、支持细胞和基细胞3种细胞。犬嗅球呈卵圆形，位于筛骨的后方，脑的最前部。嗅球的结构层次清晰，有利于信号的整合和传导，为嗅觉信号传导的中继站，属于嗅觉系统的初级中枢[1，2]。
1、2 犬嗅觉系统分类
犬的嗅觉系统一般分为两个系统，主嗅觉系统（MOS）由鼻腔中的嗅球和嗅觉上皮组成，犁鼻系统（VNS）由梨鼻器器官组成。尽管两种嗅觉系统来自异源的进化途径，但两者在生物功能上密切相关，有相似的分子、细胞过程及类似的适应生态变化情况。MOS主要是识别环境中的化学气味。而犁鼻器系统（VNS）对小范围内特异性的化学感应信号-信息素的识别更加灵敏，被认为是主嗅觉系统的辅助结构。
2 嗅觉传导通路
嗅觉起始于嗅神经元纤毛上的嗅觉受体与气味分子（Odorant，嗅质）的相互作用。在气味感受过程中，疏水性的嗅质首先与嗅质结合蛋白（Odorant bidningporetin，OBP）结合，之后嗅质与嗅质受体（Odorant receptor，ODR）作用，嗅质受体是一种G蛋白偶联受体（Gprotein-coupled receptors，GPCRs），它能转导嗅觉信号，在细胞膜外侧，嗅质与ODR结合后，内侧活化的G 蛋白随后激活腺苷酸环化酶，使细胞内大量的ATP转化成cAMP，cAMP是细胞内第二信使，打开离子通道，Na+和Ca2+内流使嗅神经元细胞膜去极化，最终产生动作电位。嗅神经元通过轴突把动作电位传导到大脑前端的嗅球，嗅觉信号在嗅球中经过加工、修饰和编码后，通过嗅球的输出神经元僧帽细胞和丛状细胞的轴突投射传导到大脑皮层，在那里嗅觉信号被解码以分辨不同的气味，形成对气味的感受[3]。
3 犬嗅觉系统受体
3、1 犬嗅觉系统受体分类及结构特征
自Buck等[4]发现嗅觉受体基因超家族，迄今为止，研究人员已发现5种与动物嗅觉相关的受体，包括嗅觉受体（Odorant receptors，ORs）、犁鼻器受体（Vomeronasal receptors，VRs）、痕量胺相关受体（Trace amine-associated receptors，TAARs）、甲酰肽受体（formyl peptide receptors，FPRs）、鸟苷酸环化酶（Guanylylcyclase，GC-D）[2，5]。目前研究发现除鸟苷酸环化酶与犬嗅觉系统相关尚未见报道外，其他的4种受体都与犬嗅觉系统相关。这4种受体都属于G蛋白偶联受体超家族，各种受体蛋白质分子的氨基酸大小不一，但都具有7个长度为19～26个氨基酸疏水区即7次α-螺旋跨膜蛋白（TM）形成的结构域，总长度约为300～350个氨基酸。氨基酸链的N端在膜外侧，C端在膜内侧。这样就在细胞膜两侧各形成3个环，即3个胞内环（IC）和3个胞外环（EC）。不同的GPCR跨膜螺旋区的氨基酸比较保守，而C、N末端和回环区的氨基酸差异较大[6]。
3、2 犬嗅觉系统受体组成、表达及功能
3、2、1 OR受体的组成、表达及功能 OR基因家族是第一个被发现的嗅觉受体基因家族，Quignon等[7]研究表明，犬的OR基因根序列同源性被分为class-I和class-II两类。class-I基因是最古老的嗅觉受体基因群，其可在水生环境下被水溶性气味分子所激发，包括5个家族。class-II基因通常是在陆地环境下被挥发性的气味分子所激发，分为18个家族。犬基因组中有971个嗅觉受体基因，约占犬嗅觉受体基因组的80%。OR基因在进化过程中出现了不同程度的假基因化，即基因中含有一个或多个破坏框架（包括移码，片段终止密码，或片段破坏散布重复等）。OR基因较小，基因的长度约1 kb左右，其显著特点是编码区没有内含子，仅在编码区和5'非翻译区之间存在一个内含子。研究发现，有34个OR基因亚家族只在家犬中被发现[8]，这些特有的亚家族可能与家犬灵敏的嗅觉有关。
Tacher等[9]2005年首次进行了OR基因的多态性研究，接着Robin等[10]对OR进行了更广泛的OR基因多态性研究，研究结果表明，几乎所有的OR基因都在不同程度上具有多态性，有的SNP位点导致了氨基酸突变且具有品种特异性，甚至与犬的嗅认能力密切相关[11]。
OR蛋白质变异在气味感知的敏感性和特异性方面发挥作用，犬OR基因存在多态性和一些品种特异性变异[8]。因此，推测这些品种特异性变异可能与品种嗅觉的差异有关。然而，迄今为止，由于多数犬的OR配体仍未知，导致OR基因多样性与气味感知变异之间的相关性联系还没有建立。犬有971个嗅觉受体基因，但它能识别的气味却超过了10 000种，表明一个OR可以与多个气味分子结合，不同的OR组合也能与多种气味分子结合。这种交叉组合的方式大大增加了OR结合气味分子的种类，使OR最大程度的发挥作用。由于OR研究方法及高通量检测的局限性，很难完成单个OR基因表达的精准定位，确定与某一气味分子绑定蛋白复合物相对应的OR蛋白则更加困难。虽然，前人已对嗅觉受体基因进行了大量的研究，但由于嗅觉基因家族的多样性以及嗅觉系统的复杂性，对于嗅觉受体基因的研究还不够全面和成熟，尚需进一步深入研究。
3、2、2 VR受体的组成、表达及功能 犁鼻器受体又称信息素受体，包括V1R、V2R两个基因家族。V1R、V2R基因分别发现于1995年[12]和1997年[13]，他们表达在哺乳动物梨鼻器上并参与信息素的检测。研究表明，V1R检测挥发性气味，V2R检测非挥发性蛋白质配体，但配体激活这两种受体的性质尚未完全研究清楚。
V1R基因的编码区没有内含子，全长约1 000 bp，可编码300个氨基酸左右的7次跨膜受体；V2R基因编码区含有多个外显子，蛋白产物同样是7次跨膜的G蛋白偶联受体，长度约为850个氨基酸，其中约有300个氨基酸的跨膜区域，V2R基因家族大约有200个成员。犬的基因组中只有9个具有完整编码框的V1R潜在功能基因[14，15]，假基因的数目也仅仅是60个，这与犬的犁鼻器器官相对较薄、副嗅球也相对较小相对应。犬的基因组中，仅发现了9～20个V2R假基因，犬拥有几十个完整的V2R基因，但是它们在体内完全退化。犬通过V1R基因识别外激素的能力可能被发达的主嗅系统所取代，因而发生退化。犬犁鼻器的退化令人惊讶。犁鼻器受体一旦被转换，运输，加工，会导致两性啮齿动物行为的变化，包括雄性间相互攻击，和长时间神经内分泌改变[16]。
目前，人们很难解释犬依赖信息素传递信息的某些行为，如期母犬如何吸引公犬前来、公犬何以借助尿液划属领地等[11]。VR基因在犁鼻器的各层神经元细胞中以区域特异性的方式表达。信息素是由一个个体分泌并被同种另一个体感受并识别的化学物质，随之引发群体内与个体交流和生殖相关的一系列生理和行为变化[10]。另外，与该途径相关的分子包括非典型的组织相容性复合体（MHCⅠb）分子、β2-球蛋白（β2m）、三磷酸肌醇（IP3）和瞬时受体电位（TRP）家族成员TRPC2等。其中，只有x子通道TRPC2与信息素受体V1R和V2R一样，不参与其他生理学过程，仅在信息素传导方面发挥特异性作用[17]。近年来，虽然对于哺乳动物信息素受体的研究及认识有了长足进步，但犁鼻系统在哺乳动物嗅觉功能中所扮演的角色[18]及哺乳动物信息素感知的分子机制尚不完全清楚，仍需进一步研究。
3、2、3 TAAR受体的组成、表达及功能 痕量胺相关受体是由TAAR基因编码的蛋白，是至关重要的细胞间信号分子[19]。系统发育史研究表明，哺乳动物的祖先拥有9个TAAR基因即TAAR1-9。但在犬体内某些TAAR基因退化为假基因，犬的基因组中有两个功能基因TAAR4和TAAR5，两个假基因TAAR1P和TAAR2P，而犬全基因组中却有大量OR基因，其中822个基因功能，而假基因只有25、3%的比例，原因可能是TAARs与ORs的功能存在重叠，犬可能更趋向于依赖数量较大的ORs，导致TAARs 减少退化。
犬的TAARs表达在散落在嗅觉上皮细胞中的嗅觉神经元的一个子集中，另有研究表明，其也表达在格吕内贝格神经节上[20]，犬的TAAR家族基因保守性和退化成假基因并存的特点与嗅觉受体基因极为相似。目前，哺乳动物TAAR1基因是研究最为广泛的痕量胺相关受体。由于犬TAAR1基因退化成假基因，致使与TAAR1功能相关的犬行为特点，如易接受训练、能够解读奖惩等研究变得越发有趣[11]。目前，人们只能推测犬具备另外两个潜在的功能性TAAR基因来补偿缺失的TAAR1功能。
3、2、4 FPR受体的组成、表达及功能 甲酰肽受体是哺乳动物独有的一种气味受体。Migeotte等[21]2006年首次报道甲酰肽受体表达在免疫系统。参与炎症和免疫应急反应的甲酰肽受体也能在犁鼻器中表达，参与犁鼻器信号传导。FPR受体家族共有7个成员，其中5个表达在犁鼻器神经元，另外2个表达在免疫系统[22]，犬基因组包含1～2个FPR基因。因为，甲酰肽受体主要在吞噬细胞表面表达，并能够与细菌性趋化肽相互作用，因而也将它们称为化学趋化物受体。甲酰肽受体可能在犬防御微生物感染中起着非常重要的作用。在进化过程中，甲酰肽受体转录有趋于稳定的趋势。犁鼻器FPR基因表达谱非常类似于V1R和V2R的基因表达谱，即有选择地表达在一个犁鼻器神经元小子集上。
目前，人们在鼠体内发现了犁鼻器特异性甲酰肽受体，但在犬体内并未发现[23]。FPR受体识别特定感觉配体，而这些配体不被V1R和V2R识别。另外，FPR受体与V1R或V2R共同识别特定的配体但他们各自生成专门的传输信号，传输到不同的大脑区域[8]。在未来，随着基因组测序覆盖率的增加和越来越多的基因组被测序，以及直接进行基因组功能分析的实现，为更进一步的探究FPR家族的进化及其功能提供更高效的研究工具。
4 展望
嗅觉对犬是一种极其重要的生理感觉，近年来，前人对犬嗅觉系统受体基因和蛋白的结构、组成、表达部位及嗅觉传导机理等进行了一系列研究，并取得了很大进展，尤其是各嗅觉相关受体基因家族的发现和研究推动了国际上嗅觉研究的快速发展。但对嗅觉的发生机制尚不清楚，随着嗅觉系统受体基因、蛋白质及新的化学气味感受受体的相继发现与深入研究，人们对犬嗅觉系统的认识与利用将上升到一个新高度。嗅探犬作为操作工具，已被用于军用和民用等社会的各个领域检测不同的气味。犬不同的嗅觉系统存在和表达不同的气味受体，研究不同用途犬的嗅觉系统受体基因及其多态性，逐一探索化学气味感受受体的功能及调控，从而寻找嗅觉系统受体基因的多态性与气味识别之间的联系，将嗅觉系统受体特异基因结构与功能相关联，有助于开展犬嗅觉系统功能的研究，以便更深入了解犬嗅觉灵敏的原因，为犬嗅觉的科学利用提供理论依据。而基因组测序将为嗅觉基因多态性的研究，提供更精确和快速的工具。因此，寻找和筛选犬完成各种气味识别的主要候选基因，以及其下游通路和激活途径，可以为相关嗅觉功能等疾病的防治寻找潜在的靶点，并且对加快培育高嗅觉灵敏性的工作犬育种工作具有重要意义。另外，随着近年来现代仿生科学技术的迅速发展，研制与使用嗅觉仿生生物设备，可为以嗅觉研究为基础的其他交叉学科带来新的发展契机，并将成为未来生物科学的热点和发展趋势。
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【关键词】 糠酸莫米松鼻喷雾剂；通窍鼻炎颗粒；变应性鼻炎
变应性鼻炎指的是过敏性鼻炎， 指特应性个体接触变应原后由IgE介导的介质释放， 有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜非感染性炎症疾病[1]。该病导致患者的劳动力丧失并引发许多疾病， 严重影响了患者的身心健康， 病因主要有遗传因素和变应原暴露， 打喷嚏、鼻塞、鼻痒等均是变应性鼻炎的临床表现。本院研究糠酸莫米松鼻喷雾剂联合通窍鼻炎颗粒治疗变应性鼻炎的疗效， 现报告如下。
1 资料与方法
1、 1 一般资料 选取本院2012年3月～2014年9月收治的80例变应性鼻炎患者作为研究对象， 所有患者均确诊为变应性鼻炎， 研究对象排除有严重心、肝、肾等脏器功能不全、精神有障碍的患者。随机将患者分为对照组和实验组， 各40例。对照组男21例， 女19例， 年龄15～61岁， 平均年龄（38、64±8、07）岁。实验组男20例， 女20例， 年龄17～68岁， 平均年龄（39、51±9、84）岁。两组患者年龄、性别等一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0、05）， 具有可比性。
1、 2 方法 对照组接受糠酸莫米松鼻喷雾剂治疗， 向每侧鼻腔喷100 ?g， 1次/d， 连续用药4周。
实验组在对照组的基础上接受通窍鼻炎颗粒治疗， 2 g/袋， 3次/d， 1袋/次， 用温开水冲服， 连续用药4周。
1、 3 疗效判定标准 对患者的临床症状和体征进行评分， 计分标准为：1分：喷嚏一次连续3～9个， 擦鼻次数≤4次/d， 偶尔有鼻痒、鼻塞。2分：喷嚏一次连续10～14个， 擦鼻次数5～9次/d， 有蚁爬感， 鼻塞不严重。3分：喷嚏一次连续≥ 15个， 擦鼻次数≥10次/d， 鼻痒难忍， 鼻子完全堵塞， 用口呼吸。按照评分总和的变化情况计算最终数值， 评估患者的临床疗效， 最终数值=（治疗前总分-治疗后总分）/治疗前总分×100%。疗效标准为：显效：最终数值≥66、00%；有效：最终数值26、00%～65、00%；无效：最终数值≤25、00%。总有效率=显效率+有效率。
1、 4 统计学方法 采用SPSS20、0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P
2 结果
2、 1 实验组显效21（52、50）例， 有效16（40、00）例， 无效3（7、50）例， 总有效率为92、50%；对照组显效19（47、50）例， 有效11（27、50）例， 无效10（25、00）例， 总有效率为75、00%；两组总有效率对比差异有统计学意义（P
2、 2 对照组治疗前症状评分为（10、14±1、71）分， 体征评分（2、46±0、73）分。治疗后症状评分为（5、37±1、52）分， 体征评分为（1、25±0、41）分。实验组治疗前症状评分为（10、26±1、64）分， 体征评分为（2、57±0、65）分。治疗后症状评分为（2、44±1、28）分， 体征评分为（0、39±0、14）分。两组患者治疗后症状和体征评分均较前降低， 实验组降低更明显， 差异均有统计学意义（P
3 讨论
近年来过敏性鼻炎的发病率呈上升趋势[2]， 当患者接触到应变原时， 立即会发生Ⅰ型变态反应， 产生免疫球蛋白， 附着在介质细胞的表面， 使机体变得敏感， 当抗原体再次入侵与介质细胞表面的IgE结合时会产生一系列的变化， 增加毛细血管的通透性和腺体分泌， 变应性鼻炎的临床症状主要有打喷嚏、鼻痒等， 常反复发作， 严重影响患者的生活质量[3]。
糠酸莫米松鼻喷雾剂是一种局部用的糖皮质激素， 能够起到抗过敏的作用并且不会引起全身作用， 主要是通过内皮细胞的增强， 稳定溶酶体膜来对炎症介质的释放进行抑制， 并抑制免疫反应， 降低抗体的合成， 通过对毛细血管渗出的抑制和粘性细胞的减少， 使症状得到迅速的缓解。变应性鼻炎的病理生理过程都集中在鼻黏膜， 糠酸莫米松鼻喷雾剂可以直接在鼻黏膜上发挥作用， 不会发生任何全身性副作用， 但不能抑制体内白三烯的合成与释放， 容易使病情反复发作[4]。
变应性鼻炎是属于鼻鼽的范畴， 患者肺气虚弱， 治疗主要是以祛风通窍和益气健脾温肾为主。通窍鼻炎颗粒是由黄芪、白芷、白术等组方， 其中、白芷等药物能够达到清热通窍和止痛的效果， 黄芪能够补肺气、益脾气， 所有药物均有不同的作用， 联合使用能够疏风化浊、清热通窍[5]。应用到变应性鼻炎的治疗中能有效地提高临床效果。
综上所述， 糠酸莫米松鼻喷雾剂联合通窍鼻炎颗粒治疗变应性鼻炎的疗效显著， 能快速地改善患者的临床症状和体征， 值得在临床上推广。
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【关键词】鼻息肉;TNF-a;ICAM-1;IL-5
The serum level of TNF-a、ICAM-1、IL-5 before and after treatment in patients with nasal polyps
【Abstract】 Objective To survey the role of TNF-a,ICAM-1 and IL-5 in nasal polyps、Methods The serum levels of TNF-a,ICAM-1 and IL-5 in patients with nasal polyps and the health control were detected by ELISA before and after treatment、Results The levels of TNF-a in patients before treatment were significantly higher than that in healthy control、After treatment the levels were decrease,but the difference to before was not significant、The levels of ICAM-1 and IL-5 in patients before treatment were significantly higher than those in healthy control、After treatment the levels were decrease significantly、Conclusion TNF-a,ICAM-1 and IL-5 plays important role in nasal polyps and therapy、
【Key words】Nasal polyps; TNF-a; ICAM-1; IL-5
近年来,鼻息肉的发病率有逐年增高的趋势,多见于成年人,是由鼻腔黏膜长期水肿所致,以变态反应和慢性炎症为主要病因,但发病机制尚未明确。本文通过检测TNF-a、ICAM-1、IL-5在鼻息肉患者血清中表达水平的情况,以了解其与鼻息肉之间的关系。
1 对象和方法
1、1 临床资料 选择我科住院治疗的鼻息肉患者32例,男18例,女14例,年龄25~56岁,平均(37、5±6、8)岁。其中双侧鼻息肉25例,同时伴有鼻窦炎5例;单侧鼻息肉7例。所有患者术前均予局部使用激素(地塞米松)治疗,后采用切除术或电熨术治疗。对照组选择我院健康体检者30例,男16例,女14例,年龄28~55岁,平均(36、4±12、8)岁。
1、2 方法
1、2、1 标本采集所有患者均于治疗前、后及对照组分别取清晨空腹肘静脉血2 ml,离心取血清。-20℃保存待测。
1、2、2 方法 血清TNF-a、ICAM-1、IL-5均采用Ellisa试剂盒(上海沪峰生物科技有限公司)进行检测,操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
1、2、3 统计学方法 所有数据采用表示,组问比较采用t检验,P
2 结果
如表1所示鼻息肉患者治疗前血清TNF-a含量较对照组明显升高,差异有显著性;治疗后较治疗前下降,但差异无显著性。
如表2所示鼻息肉患者治疗前血清ICAM-1含量较对照组明显升高,差异有显著性;治疗后较治疗前明显下降,差异有显著性。
如表3所示鼻息肉患者治疗前血清IL-5含量较对照组明显升高,差异有显著性;治疗后较治疗前明显下降,差异有显著性。
3 讨论
鼻息肉的发病机制目前尚未彻底阐明,但近年来细胞因子在鼻息肉的发生发展过程中发挥重要作用已得到大家的共识。研究表明有些细胞因子(如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、肿瘤坏死因子、IL-4、IL-8、p-选择蛋白)可直接或间接促进嗜酸性粒细胞的聚集与活化,另外,sICAM-1及ICAM-1与其配体结合的信号也可以激活嗜酸粒细胞,增强其氧化代谢和脱颗粒。而且IL-3、II-5、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子还具有抑制嗜酸性粒细胞凋亡的作用。各种炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞,均可参与激活、释放、诱导和调节多种细胞因子,如IL-1、IL-5、IL-6、IL-8、TNF-a、IFN-7等。而这些炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞已被证实大量浸润于鼻息肉和鼻息肉病的息肉组织中。细胞因子不仅可由炎性细胞合成、释放,还可以直接或间接地促进上述细胞的聚集和活化,从而保持了细胞因子和炎性细胞的“永生”,两者在鼻黏膜内呈现一种滚动效应,其结果鼻黏膜炎症及水肿持续存在并有加重的倾向。如某些细胞因子可上调内皮细胞表面ICAM-1的表达,TNF-a等可使ICAM-1的信使RNA(mRNA)表达增强,致翻译合成ICAM-1的量增多。同时由膜型ICAM-1裂解或由ICAM-1 mRNA直接翻译入血液循环的sICAM-1的量也增多,从而又促进了嗜酸粒细胞的浸润。以上各因素在鼻息肉形成过程中相互作用,形成调控网络[1,2]。但细胞因子所发挥的作用及它们在鼻息肉和鼻息肉病中表达的差异,不同学者的检测结果并不一致,需进一步探讨。
本研究结果显示,TNF-a、ICAM-1、IL-5在鼻息肉患者血清中的表达水平均表现为鼻息肉治疗后较治疗前有显著下降,这与Pietruszewska等[3-5]的研究结果一致,提示这三种细胞因子之间存在相同趋势的变化,可能与鼻息肉的发生发展进程有关。推测机体受某种因素影响后,TNF-a水平升高,引起ICAM-1的高表达,从而促进嗜酸粒细胞的浸润、活化,分泌大量的细胞因子,如IL-5,最终形成鼻息肉。
总之,细胞因子的进一步研究将揭示鼻息肉病的发病机制,对鼻息肉病的诊断、治疗、预防等方面都具有重要意义。至于TNF-a、ICAM-1、IL-5与鼻息肉之间的关系以及其在鼻息肉发病机制中的作用还有待进一步探讨。
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【关键词】木丝线;Sorbalgon藻酸钙敷料;鼻内窥镜手术
【中图分类号】R765、04+1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)12-149-1
鼻内窥镜手术是目前耳鼻咽喉科开展最广泛的一种手术方式,其适应症已从以往单纯鼻窦炎与鼻息肉,发展到现在鼻腔顽固性大出血,鼻神经外科,鼻眼相关外科,鼻颅底外科,头颈肿瘤外科等[1,2],术后鼻腔填塞敷料的选择一直是临床上关注的焦点。近年来术腔填塞敷料主要是Sorbalgon藻酸钙,由于其质地柔软,抽出时可能断裂而导致残留。现在我科往Sorbalgon藻酸钙敷料中加入一根木丝线后,能够避免其断裂,取得了满意的效果,报告如下。
1资料与方法
1、1临床资料
从2006年8月～2009年8月因慢性鼻-鼻窦炎、鼻息肉、鼻出血等行鼻内窥镜手术的患者908例,随机抽取术后创面用带有木丝线的Sorbalgon藻酸钙和单纯用Sorbalgon藻酸钙填塞患者各45例,将填塞敷料一次性抽出率进行比较。
1、2方法
(带有木丝线的Sorbalgon组)45例患者,术中取一根Sorbalgon藻酸钙,将其纵向分为2根,分别用单根1-0木丝线加入Sorbalgon藻酸钙中,线头在该Sorbalgon藻酸钙的两端打结系紧,然后搓成麻绳状,在0°鼻内窥镜下用枪状镊填入术腔,稍用力压紧,尾端留在近前鼻孔处的顶端,木丝线的线头亦留在近前鼻孔处,以便抽除。术后填塞24h,期间不用其他处理,用含有盐酸肾上腺素-地卡因的棉片行鼻腔表面麻醉和收敛后再抽出填塞物,均一次性取得成功。
对照组的45例患者单纯用Sorbalgon藻酸钙填塞,抽除敷料时有5例出现断裂现象,使操作难度系数增加,给医师操作时带来了一定的麻烦。现通过两组填塞物一次性抽出的情况进行比较观察。
2结果
用带有木丝线的Sorbalgon藻酸钙敷料在24h后均一次性抽除,一次抽出率为99、9%,使操作更简单,患者痛苦小,出血少,创面损伤小。而对照组有5例在抽除时出现敷料断裂,其一次抽出率为88、9%,则需要两次或者多次抽取,明显增加了抽除的难度。
3讨论
鼻内窥镜是鼻腔及鼻窦手术的重要技术,在鼻内窥镜手术后,如何恰当的选择及使用填塞止血材料对鼻腔愈合至关重要[3]。一般情况下,Sorbalgon藻酸钙被用作耳鼻咽喉科的鼻腔填塞材料,但是其质地柔软,容易撕断,导致部分残留。现将一根木丝线加入其中,则明显改善了它的功能。
Sorbalgon藻酸钙敷料的主要成分为藻酸钙,是从海藻中提取的二价阴离子的多糖藻酸盐与二价阳离子的钙离子通过交联聚合作用而形成,其质地柔软,顺应性好,较易黏附于黏膜表面;与血液和分泌物中的钠盐接触,即转化为一种凝胶状物质,具有良好的生物相容性和亲水性,可大量吸收渗出液,有效控制出血,同时对鼻腔粘膜创伤小,而且还有利于鼻腔术后术腔的上皮化。但是在达到止血及促进创面愈合目的后,由于Sorbalgon藻酸钙质地柔软,纤维韧性较差,易断,尤其是填塞形成凝胶状物质后,抽出时可能断裂而导致部分残留,需要多次抽取。由于反复操作的刺激,不仅容易损伤鼻腔的新生上皮,形成二次创面,使术腔出血的几率增大,延缓了术腔的愈合,而且在操作过程当中也增加了病人的痛苦。我科于2006年开始使用带有木丝线的Sorbalgon藻酸钙敷料用作鼻内镜术后填塞材料,明显改善了Sorbalgon藻酸钙这一不足之处,实践证明其具有更好的治疗作用。本组用该敷料填塞的45例患者中,在抽除敷料时均取得一次性取得成功,让操作更为简单,安全。避免了因多次抽取对术腔形成二次创面,同时减少出血和降低细菌的感染机会,有效保护手术创面,避免与创面粘连,不会损伤鼻腔黏膜,同时可促使坏死坏死组织脱落,清洁创面,加速创面愈合及上皮恢复,同时使患者免受了在这些反复的操作过程当中带来的痛苦。
总之,本研究说明带有木丝线的Sorbalgon藻酸钙敷料是一种更好的鼻腔术后填塞材料,与传统的单纯用Sorbalgon藻酸钙填塞相比,操作更简单,安全,创面损伤小,出血少,患者痛苦小,具有更好的实用价值,在临床上值得推广。
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1资料与方法
1、1 一般资料170例过敏性鼻炎患者均是来自本院五官科门诊患者，每一病例都经病理学证实，取材都是在患者鼻过敏反应症状加重，鼻分泌物明显增多的情况进行。叮咐患者用力吹出鼻内的分泌物置于干燥灭菌的宽口小瓶内，挑取分泌物中的脓液或比较黏稠部分制成薄片，进行检测。
1、2 方法 瑞氏染色法 、试剂本科自制；采用医学显微镜观察，力求找到嗜酸性粒细胞。
2 结果
170例患者中，165例鼻分泌物检测到嗜酸性粒细胞，总检出率97、1%。其中12例检测到单个嗜酸性粒细胞，检出率7、1%；46例检测到散在分布嗜酸性粒细胞，检出率27、1%；107例检测到以嗜酸性粒细胞为基质的脓球，检出率62、9%（见表1）。
3讨论
过敏性鼻炎属于鼻炎中较为常见的一种类型。过敏性鼻炎的患病率每年都有明显的升高，已经影响到了全球25%的人群，特别是工业发达的地区患病率更高。目前在美国该类患者的患病率在5%～22%，大约有5千万的人口被确诊为患有过敏性鼻炎，而治疗的费用每年达到近77亿美元。而在亚洲11个国家进行调查表明，其人群中过敏性鼻炎的人群约10%～30%，其中儿童的患病率在10%～46%。在我国，由于经济发展和工业的告诉发展，生活方式的改变等都影响了这类疾病的患病率升高。虽然该类疾病不会有致命危险，但是会严重影响人们的生活质量，造成个人的经济和心理负担，而儿童则会因此而影响学业和身体发育。
常规性的过敏性鼻炎一般分为两种，季节性与常年性。季节性一般是由于季节的植物花粉过敏，例如由于风季传播植物花粉，以及季节性的真菌传播；而后者主要是因为生活中的螨虫或动物皮屑等过敏源导致。过敏性鼻炎也称变应性鼻炎，是指特应性个体接触变应原后，主要由IgE介导的介质（主要是组织胺）释放，并有多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻粘膜非感染性炎性疾病。过敏性鼻炎属I型变态反应，在变态反应过程中释放出大量的嗜酸性粒细胞趋化因子，而嗜酸性粒细胞因子促使血液中嗜酸性粒细胞向变态反应部位聚集[1]，以致鼻分泌物中大量嗜酸性粒细胞出现，可见鼻分泌物检测到嗜酸性粒细胞是过敏性鼻炎的特征[2]。目前经医学证实IgE的水平会与HLAⅡ类等位基因型有关。多种细胞因子、化学增活素、细胞粘附分子、炎症介质都会参与到过敏性鼻炎的发病过程之中。
通过对鼻分泌物中的嗜酸性粒细胞分析可见，嗜酸性粒细胞在鼻分泌物涂片中，当以单个细胞存在时，细胞形态大多数都比较完整，胞浆中的嗜酸性颗粒较粗大，分布较均匀，颜色呈桔红色，胞核呈现出染得较偏碱的深紫蓝色，可见到损伤现象；当以数个细胞散在分布时会发现细胞核的颜色被染的更深紫蓝色，可观察到的损伤现象较单个细胞存在时更明显，嗜酸性颗粒往往逸出细胞体外；当以成块的脓样存在时，多个细胞堆叠在一起，形成一个核团，一般核团周围布满嗜酸性颗粒，颗粒分布均匀，形状粗大，呈现明显的桔红色，很容易被找到。
嗜酸性粒细胞在气道的过敏性炎症中有着重要作用，无创性的细胞学检验方法是在上气道的鼻分泌物涂片或鼻灌洗方式为主，下气道主要以诱导痰为主，而通过手机上下气道的分泌物来做细胞学的检查可以明确的得到炎症细胞更为全面的信息，包括其形态、类型和比例等，因此可以有效的反映出气道炎症处组织的改变以及炎症类型、严重程度。而一般在门诊就医的患者中，以中重度过敏性鼻炎患者居多，轻度患者由于不影响正常生活一般不会选择前来就医，所以一般在研究过程中，对象以中重度对象为主。
一般研究表明过敏性鼻炎患者不仅在上气道存在大量的嗜酸性粒细胞浸润，在下气道这种水平也相当高，这一结论已经得到国内外研究者的证实。而上气道对于下气道的营销可能来源于以下几方面：①系统性变态反应炎症，过敏性鼻炎患者可能会出现对变应原产生全身性的变态反应，鼻粘膜会因为受到变应原的刺激而分泌出细胞因子和炎症介质，一方面可以通过气道直接进入下气道，另一方面又可以被吸收进入血液循环，整个呼吸道内都会出现相应的炎性反应；②神经源性的严重，由于神经末梢释放的神经肽和介质会导致鼻粘膜产生炎症反应，可以影响到下气道，并引起支气管与肺部的炎症反应。而像骨髓反应等全身性和呼吸道粘膜的原位造血机制在呼吸道严重反应中也有一定的作用。
尽管当下实验室的检验方式不断的完善，但是如果要全面的了解AR的诊断还是非常有价值的。需要详细的询问患者的症状，其中包括病情持续时间、反应强度等，其次要了解导致的原因、季节变化影响、环境变化、过敏反应，以及治疗的情况。其中个人病史是研究疾病危险情况的关键，而过敏性鼻炎的诱发原因是治疗的关键。特别是如花粉、宠物过敏等原因，而有些患者则是因为尘螨、蟑螂、霉菌等过敏源而少有感知到，一定要注意询问这些过敏源的过敏情况。
使用前鼻镜对鼻部进行全面彻底的检查是对诊断的有力保证，其中包括鼻甲、粘膜色泽、鼻腔粘液的数量和质量进行检验观察。而鼻内镜则可以检查鼻部和鼻塞的病理问题的改变，如果使用普通的鼻部内窥镜和鼻咽部的检查就会漏掉相关问题。过敏性鼻炎患者常规情况下还需要进行眼部、咽部、耳、皮肤以及胸部的检查。
而诊断性的试验也是帮助过敏性鼻炎诊断的一种有力方法。其中最常用的就是皮肤过敏源点刺试验以及异性血清IgE。而皮肤试验中最常用的是斑片试验，一般适用于3岁以上的儿童，该方式方便安全，被广泛的适用于临床中。但是皮肤测试反复性高将存在试验的风险，并且试验的结果较为复杂，需要通过专业训练的人员来操作。对于不能够终止药物治疗的患者而言，皮肤试验并不是合适的选择。并且如果有大面积皮肤损伤者也不适宜做皮肤试验。而选择放射性变应原吸附试验则更为合适，她比皮肤试验的特异性高，且灵敏度低，更适合于各年龄层。
一旦过敏性鼻炎患者确诊后就应该根据症状持续的时间和严重性进行分级。虽然以季节性和常年性变应性鼻炎的分类在临床中广泛使用，但是这种分类也遭到质疑，特别是对于一年四季都存在霉菌、花粉等地，那么就不存在于季节性特点，这种情况下就难以分类，但是在我国这种情况的地区较少，因此常规分类还是具有参考意义。如果过敏性鼻炎每周出现4d以上，那么就可以判定为常年性变应性鼻炎，否则就属于间歇性鼻炎。同时根据严重程度，有可以分为轻、中、重度。如果出现了睡眠障碍、日常活动受限制影响、学习与工作能力下降，则可能属于中度或重度范畴，如果不是，则一般归类为轻度。
此外，过敏性鼻炎的诊断也应该关注特例情况，例如鼻中隔偏曲、鼻部肿瘤、腺样体增殖肥大，鼻甲肥大、肉芽肿病等。
综上所述，过敏性鼻炎患者的鼻分泌物中容易检测到嗜酸性粒细胞，本研究显示过敏性鼻炎患者鼻分泌物中嗜酸性粒细胞被检出率高达97、1%。本实验采用的方法，方便快捷，成本低廉，较容易实施；嗜酸性粒细胞也容易被辨认。涂片检测鼻分泌物中嗜酸性粒细胞具有很高的可行性，对协助诊断过敏性鼻炎是很高的有效性，是很有价值的。
参考文献：
[关键词]通鼻清窦片 生产工艺 质量控制
中图分类号：TD945 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）13-0287-01
急慢性鼻炎为临床常见病和多发病。我院经中医辨证和临床观察自行研制的通鼻清窦片具有清肺、通窍、排脓之功效，临床用于 治疗 急慢性鼻炎、鼻窦炎十多年取得满意疗效。通鼻清窦片系院内制剂，没有质量控制标准。为提高药品质量，确保用药安全有效，用薄层法对白芷、桔梗进行鉴别，结果表明，本法具有灵敏、准确、表现性好的优点，可用于控制本品的内在质量。现将其制备方法及质量控制 总结 如下。
一、仪器与试药
PQ-3120超声波清洗器（菲罗门天津科技 发展 有限公司），ZF-2型紫外分析灯（上海市安亭 电子 仪器厂），L1100生物显微镜（广州光学仪器厂），硅胶G（青岛海洋化工厂），欧前胡素、异欧前胡素对照品，白芷对照药材，桔梗对照药材由 中国 药品生物制品检定所提供；通鼻清窦片（临沂市中医 医院 制剂制剂中心），其他试剂均为分析纯。
二、制备技术
1、 处方 苍耳子15 kg、鹅不食草5 kg、白芷10 kg、天花粉10 kg、败酱草15 kg、桔梗10 kg、薄荷5 kg。
2、 制法 将苍耳子、败酱草、桔梗、鹅不食草四味水煎提取3次，第1次2 h，第2次、第3次各1、5 h。合并提取液过滤，将滤液浓缩至稠膏状，再将天花粉、薄荷、白芷低温烘干，粉碎，加入稠膏中烘干，粉碎过筛。用适当浓度的乙醇做黏合剂湿法制颗粒，压片，送检，包装即得。理论产量800瓶，100片/瓶，0、3 g/片。
三、 质量控制
1、 性状 本品为棕褐色片剂，气微，味苦。
2、 鉴别
1） 显微鉴别 显微镜下观察可见淀粉粒甚多，腺鳞的腺头呈扁圆球形，由8个分泌细胞排成辐射状。分泌腔碎片含黄棕色分泌物。
2） 白芷的薄层鉴别 取本品10片，研细，加石油醚（60 ℃～90 ℃）10 ml，超声处理20 min，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取白芷对照药材1 g，加石油醚（60 ℃～90 ℃）10 ml，同法制成对照药材溶液。再取欧前胡素、异欧前胡素对照品，加醋酸乙酯制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液5 μl、对照药材及对照品溶液各2 μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30 ℃～60 ℃）乙醚（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3） 桔梗的薄层鉴别？ 取本品10片，研细，加硅藻1、5 g研匀，加水氯仿盐酸（10∶10∶3）40 ml，加热回流2 h，放冷，分取氯仿层，滤过，滤液作为供试品溶液，另取桔梗对照药材2 g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板（硅胶铺板前用0、1%NaOH调制成碱性板）上，以正己烷醋酸乙酯冰醋酸（3∶2∶1）为展开剂，展开、取出、晾干喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热10 min，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 3、 检查 差异限度5%；崩解时限
四、讨论
急慢性鼻炎、鼻窦炎为常见病多发病，以青少年和老年人多见，冬季多发，祖国医学认为属中医鼻渊范畴。急性鼻炎、鼻窦炎，多因感受外邪，肺失宣肃，致鼻窍窒塞，久治不愈或肺气亏虚则邪热内蕴，转化为慢性。治则宜祛风散邪，通窍排脓。方中苍耳子、鹅不食草、白芷辛温归肺经，乃治鼻渊之要药，散风除湿、通窍止痛。白芷又兼消肿排脓；天花粉、败酱草归肺经，清热排脓；薄荷芳香开窍、桔梗宣肺、祛痰排脓、载药上行引诸药直达病所。诸药合用共奏清肺排脓通窍之功效。由于本方为纯中药制剂，成分复杂，因技术原因无法做定量分析，故将白芷、桔梗的薄层色谱鉴别作为质量监控手段，经多批制剂验证，方法简便准确，专属性强，重复性好，可用于控制本品的内在质量。本品为纯中药制剂，处方合理，制备工艺简单，疗效可靠，使用安全，是 治疗 急慢性鼻炎、鼻窦炎的理想药物，适合 医院 制剂开发应用。
参考文献
[1] 赵小燕，通鼻清窦片的制备与质量控制，，2011，09、
[2] 梁春华，哈永红，张莉，等、反相高效液相色谱法测定通窍鼻炎片中欧前胡素的含量[J]、中国 药业，2005，14（3）：42、
[3] 闵云山、复方苍耳子滴鼻液的质量控制[J]、中药研究与信息，2001，3（7）：43、